As células tronco mesenquimais (CTM), atualmente também conhecidas como células estromais mesenquimais (CEM), são amplamente utilizadas na terapia celular por conta da sua capacidade de autorrenovação, propriedades imunorreguladoras, promoção da angiogênese, destacando-se pela capacidade proliferativa e facilidade de obtenção. Foram utilizadas neste estudo tanto células que passaram pelo processo de criopreservação, quanto células em P0 recém coletadas e isoladas do tecido. Durante o processo de isolamento e cultura, foi feita uma reavaliação dos materiais utilizados, com o objetivo de restabelecer um protocolo para isolamento, cultivo e expansão de células tronco mesenquimais, a fim de otimizar a técnica e minimizar danos ao material de estudo. Após a coleta, as amostras foram processadas e as células extraídas e cultivadas em DMEM, e feita a avaliação morfológica a fim de entender o quão efetivo é o uso do tampão de lise de hemácias, o quanto a utilização do tampão é de fato necessária, uma vez que caracteriza um estresse a mais para a célula em cultura. Portanto, o objetivo deste trabalho foi padronizar os métodos utilizados no isolamento e cultura de células tronco mesenquimais, simplificando o processo e tornando-o mais eficiente visando o melhoramento da cultura, e sua futura utilização no campo da terapia celular.