Amebas de vida livre do gênero Acanthamoeba são protozoários amplamente distribuídos no ambiente. A ceratite amebiana (CA) é a infecção mais comum no ser humano causada por Acanthamoeba spp. CA é uma inflamação da córnea grave que pode levar a perda de visão e está associada frequentemente a usuários de lentes de contato. Atualmente o tratamento é realizado em combinação com agentes quimioterápicos como biguanidas e diamidinas. Acanthamoeba spp. apresentam-se como cistos ou trofozoítos. O trofozoíto é a forma metabolicamente ativa da ameba, possui a capacidade de se reproduzir, locomover, alimentar e aderir as células hospedeiras, por outro lado, o cisto é a forma metabolicamente inativa, possuem dupla parede e conferem resistência ao protozoário. O ergosterol é o principal esterol presente nas membranas de trofozoítos e cistos de Acanthamoeba spp. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo aplicar o antifúngico voriconazol livre associado ao pequeno RNA de interferência (siRNA) 14alfa-demetilase para o controle da proliferação e encistamento da Acanthamoeba spp. A construção do siRNA foi previamente desenvolvida por Camargo (2021) e foi utilizado para o silenciamento da enzima envolvida na síntese do ergosterol (14 alpha desmetilase). Os ensaios de atividade biológica foram realizados com a cepa Acanthamoeba castellanii (ATCC 50492). Os trofozoítos foram incubados durante 24 horas com formulações com voriconazol e voriconazol associado ao siRNA. Através do ensaio Alamar Blue foi possível observar com as diferentes concentrações do voriconazol, diminuição de 35,1% da viabilidade dos trofozoítos incubados com voriconazol livre e 15,4% do voricanozol livre associado ao siRNA. O presente trabalho utilizou siRNA livre sem a incorporação em nanoemulsão, tendo em vista que no trabalho de Camargo, 2021 a viabilidade dos trofozoítos de Acanthamoeba spp. demonstra atividades semelhantes do siRNA livre e siRNA com a nanoemulsão dado ao potencial fagocitico da ameba.