Introdução: A glibenclamida é um antidiabético oral do grupo das sulfoniluréias, dotado de potente ação antihiperglicêmica é considerado um dos principais medicamentos utilizados no controle da hiperglicemia. A pioglitazona, uma tiazolidinedionas se destaca no controle da diabetes melito por aumentar a sensibilidade à insulina em órgãos periféricos insulino-dependentes. Objetivo: Estudar a atividade secretagoga do análogo JO4 apoiado na junção da estrutura da glibenclamida associada à porção da pioglitazona na atividade antidiabética. Métodos: Ratos Wistar machos adultos em jejum de 16 h foram tratadas com JO4 (1 e 10 mg/kg; via i.p.). Após 30 min de tratamento receberam sobrecarga de glicose (4 g/kg; via i.p.),  o sangue foi coletado nos tempos zero, 15, 30, 60, 120 e 180 min para determinação da glicemia, insulina e atividade LDH. Ilhotas pancreáticas isoladas foram incubadas por 60 min em tampão KRb-HEPES, com ⁴⁵Ca²⁺, 37ºC, pH 7,4 em atmosfera de carbogênio. Foi estudado o influxo de ⁴⁵Ca²⁺ na ausência/presença de JO4 (10^-6, 10^-9 e 10^-12 M) e com/sem inibidores farmacológicos (CEUA PP00479). Resultados: JO4 reduziu a glicemia e estimulou a secreção de insulina aos 15, 30 e 60 min e não alterou a LDH sérica. JO4 estimulou o influxo de calcio o qual foi potenciado na presença de glibenclamida. O diazoxide e a nifedipina inibiram o efeito do JO4, porém, a flunarizina não alterou o efeito do composto. Ainda, a tapsigargina e o dantrolene não alteraram o efeito do JO4. Por outro lado, o H89 e o RO310432 bloquearam o efeito estimulatório do JO4 no influxo de cálcio. Conclusão: Estes resultados indicam o  JO4 como um potencial secretagogo de insulina atuando via canais de K⁺-ATP, CCDV, além do envolvimento de PKA e PKC no mecanismo de transdução de sinal do composto para a homeostasia da glicose. Apoio: CNPq, CAPES, PPGBQA/UFSC.