Número do Painel
Autor
Instituição
UFSC
Tipo de Bolsa
PIBITI/UFSC
Orientador
RUBENS ONOFRE NODARI
Depto
DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA / FIT/CCA
Centro
CENTRO DE CIENCIAS AGRARIAS
Laboratório
LABORATÓRIO DE FISIOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO E GENÉTICA VEGETAL
Grande Área / Área do Conhecimento
Ciências da Vida/Ciências Agrárias
Sub-área do Conhecimento
Fitotecnia
Titulo
SynPlast: entendendo plasticidade metabólica em biologia sintética - Desenvolvimento de um modelo vegetal para análise de edição de genomas via CRISPR.
Resumo

A tecnologia CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) surgiu como uma ferramenta poderosa para modificação específica do genoma em praticamente qualquer espécie. Ela é composta por uma enzima endonuclease denominada Cas9 e uma fita de RNA guia (gRNA), que juntos formam um complexo ribonucleoproteico que direciona a enzima ao local de homologia no genoma. Existem ainda diversas lacunas no conhecimento sobre como o sistema CRISPR/Cas9 interage com os mecanismos naturais de reparo do DNA, qual a frequência e a amplitude dos efeitos fora do alvo (off-target), e qual o impacto da exposição de células vegetais ao sistema CRISPR durante longos períodos de tempo. A partir disso, este projeto tem como objetivo o desenvolvimento de um modelo celular vegetal para análise de edição de genomas via CRISPR que comtempla a identificação de mutações fora do alvo e potenciais distúrbios metabólicos oriundo dos mesmos. A metodologia do projeto envolve técnicas da cultura de tecidos para a obtenção de protoplastos de Arabidopsis, nos quais serão feitas a edição de genes. Foram utilizados softwares de predição de sítios não-alvo que utilizam a sequência do gRNA para buscar regiões com homologia no genoma hospedeiro. Até a finalização deste relatório foi possível ajustar condições de crescimento in vitro da Arabidopsis, além de resultados preliminares que confirmam a obtenção de protoplastos viáveis dessa planta. Assim, a densidade celular, o número de células vivas e a porcentagem de viabilidade das células foram adequadas conforme o descrito na literatura. Também, foram identificados 2.034 possíveis off-targets através da análise do software CasOFFinder, dentre os quais 22 foram selecionados para o desenho dos primers que serão utilizados em futuras análises de sequenciamento. Os ensaios realizados até o momento mostram que a qualidade do material biológico da planta é fundamental para o sucesso de protoplastos sadios para extração e posterior edição.

Link do Videohttps://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/212418
Palavras-chave
Cas9, Off-target, mutações, endonuclease, protoplasto.
ColaboradoresSARAH ZANON AGAPITO TENFEN

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