O gênero Acanthamoeba é amplamente distribuído no ambiente e relacionado a infecções no homem, podendo causar ceratite amebiana que acomete principalmente usuários de lentes de contato, é uma doença ocular de difícil tratamento que pode evoluir para a perda de visão. Acanthamoeba spp. apresentam-se sob duas formas, a trofozoítica, metabolicamente ativa e a cística, resistente em condições desfavoráveis. Sabe-se que o principal esterol presente na membrana de cistos e trofozoítos de Acanthamoeba spp. é o ergosterol. O trabalho teve como objetivo a aplicação de um sistema nanocarreador de pequenos RNAs de interferência (siRNA) no silenciamento da via de síntese do ergosterol no controle do encistamento de Acanthamoeba castellanii. Nanopartículas (NPs) previamente desenvolvidas por Mello Junior (2016), foram utilizadas para carreamento de siRNAs para silenciamento de uma enzima envolvida na síntese do ergosterol. A construção das sequências de siRNA seguiram critérios de Reynolds et al. (2004). Padronizou-se o melhor meio para encistamento para A. castelanii T4 (ATCC50492), avaliados nos intervalos de 24, 48, 72, 96 e 144 horas. A citotoxicidade de NPs foi avaliada frente aos trofozoítos em diversos meios de encistamento. A viabilidade foi determinada por contagem em câmara de Fuchs-Rosenthal após os períodos de 24 e 48 horas de incubação. A internalização das NPs e escape endossomal nos trofozoítos foram observados por microscopia confocal. Dos resultados obtidos, o meio NEM foi selecionado. O meio PYG foi escolhido para ensaios com trofozoítos frente às formulações de NPs, com necessidade de purificação. Os resultados sugerem a eficiência do nanocarreador na internalização das NPs contendo siRNA em A. castelanii. Até o presente momento, este trabalho mostrou a eficiência de um sistema nanocarreador de transportar pequenos RNAs de interferências em A. castellanii, além de padronizar meios de encistamento e avaliar a estabilidade do nanocarreador em diferentes meios.